Цитология мочи – это специальное исследование мочи с помощью микроскопа. Цель подобного анализа – обнаружение атипических или раковых клеток. Как правило, врач назначает подобный анализ при подозрении на опухоль мочевых путей.

Чаще всего сдается цитология при подозрении на рак мочевого пузыря, хотя по результатам можно заподозрить онкологические заболевания почки, мочеточников и уретры, рак предстательной железы.

Ваш врач обязательно назначит исследования если у вас были эпизоды появления крови в моче. Обязательна цитология мочи и у пациентов страдающих онкологий мочевого пузыря. Мониторинг позволяет вовремя обнаружить рецидив болезни.

Цитология мочи может не диагностировать маленькие и доброкачественные опухоли мочевыводящих путей, но обычно легко диагностирует большие раковые образования.

В трактовке результата анализа существуют некоторые риски. Они обычно связаны с нарушениями метода сбора анализа. Обязательно собирается моча в чистый контейнер, достаточно одной порции. Если сбор мочи происходит с помощью катетера, то возможны отклонения в результатах из-за риска возникновения инфекции мочевых путей.

Как правильно сдать цитологию мочи?

Первое утреннее мочеиспускание не подойдёт для анализа, так как клетки оставались в мочевом пузыре всю ночь, могли разрушиться и это вызовет трудности при диагностике. Утром помочитесь, примите душ, далее нужно будет собрать мочу для теста. Лучше всего для сбора и хранения подойдет стерильный контейнер. Доктор может назначить сбор анализа мочи целую неделю. Исследование большого количества образцов повышает точность результатов цитологии мочи.

В лаборатории специалист-гистолог или патолог проанализирует все клетки образца и опишет их типы, выявит изменения, указывающие на патологии.

Каждая лаборатория по-своему описывает результаты цитологии мочи, но существуют общие термины, которые фигурируют практически в каждом результате:

• Неудовлетворительный образец – означает, что нужно повторить анализ, так как в образце анализа было найдено недостаточное количество клеток или неправильные их виды.
• Отрицательная цитология мочи – в образце мочи раковые клетки отсутствуют.
• Атипичная цитология мочи – в клетках образца было найдены небольшие изменения. Клетки не были нормальными, но в то же время не похожи и на клетки рака.
• Подозрительная цитология мочи – клетки в образце не были нормальными, и возможно, могут быть злокачественными.
• Положительная цитология мочи – образце мочи обряжены злокачественные клетки.

При диагностике онкологии мочевыводящих путей используется не только анализ цитологии мочи, э только начальный этап обследования. Если при цитологических исследованиях были обнаружены отклонения, то врач назначает цистоскопию, с целью исследования мочевого пузыря и мочевыводящих путей.

Галина Семенова, Иллюстрации с сайта: © 2011 Thinkstock.

У мужа рак мочевого пузыря на ранней стадии. Каковы факторы риска, провоцирующие возникновение заболевания? Как его лечить? Альбина Ивановна, Гродно.

В последние годы в мире растет заболеваемость раком мочевого пузыря. В странах Европы с 1950 года увеличилась почти в 1,5 раза. В то же время смертность от данного недуга за этот период снизилась более чем на 30%, что объясняется ранней диагностикой и эффективным лечением.

Факторы риска

Курение. У любителей подымить болезнь возникает в 2 раза чаще. Эта вредная привычка «ответственна» почти за половину смертельных исходов от рака мочевого пузыря среди мужчин и около 30% - среди женщин. Канцерогены попадают в легкие, в кровь, а при фильтрации почками проникают в мочевой пузырь и повреждают выстилающий его эпителий.

Профессиональные риски . Опасны некоторые химические вещества, например ароматические амины (бензидин и бетанафтиламин), использующиеся в красильной промышленности. Повышенный риск у работников резинового, кожевенного, текстильного, печатного производства.

Возраст. С годами угроза возрастает.

Пол. Мужчины болеют в 2 раза чаще.

Хроническое воспаление. Мочевая инфекция, камни в почках и пузыре и другие причины постоянного раздражения органа.

Семейный анамнез . Если болезнь встречалась у членов семьи, риск патологии повышен.

Врожденные дефекты мочевого пузыря. В утробе матери у ребенка есть связь между пупком и мочевым пузырем. Это соединение (урахус) в норме после рождения исчезает. В сохранившейся части урахуса могут возникать раковые клетки.

По данным ВОЗ, рак мочевого пузыря составляет до 4% всех злокачественных новообразований, уступая опухолям желудка, пищевода, легких и гортани. В списке наиболее часто встречающихся патологий у мужчин рак мочевого пузыря на 4-м месте, у женщин - на 10-м.

Как «выследить» патологию

Кровь в моче или нарушение мочеиспускания - повод для беспокойства. Необходимо срочно обратиться к врачу.

Анализ мочи на атипичные клетки. Моча исследуется под микроскопом для выявления клеток опухоли или предопухолевых заболеваний.

Цистоскопия. С помощью тонкой трубки, снабженной осветителем, доктор осматривает мочевой пузырь и, обнаружив подозрительный участок или опухоль, берет кусочек ткани. По результатам анализа можно судить о наличии рака и его типе.

Сегодня УЗИ мочевого пузыря с успехом заменяет цистоскопию на первом этапе обследования.

Пятилетняя выживаемость больных раком мочевого пузыря варьируется в широких пределах и зависит от стадии заболевания:
при нулевой стадии - 95%, I - 85%, II - 65–75%, III - 30–65%, IV - 10–15%.

Лечение

Применяются хирургический, лучевой, лекарственный и иммунологический методы. Выбор зависит от стадии (степени распространения) недуга и морфологической структуры опухоли.

Операция. Более 70% первично обратившихся больных имеют прогностически благоприятные поверхностные опухоли. Они успешно излечиваются. Вмешательство выполняется с помощью эндоскопической аппаратуры, без вскрытия мочевого пузыря. У некоторых встречается так называемый инвазивный рак - агрессивное образование. Оно прорастает в мышечный слой органа, склонно к метастазированию в лимфоузлы таза, легкие, печень, кости. Оптимальный метод лечения при инвазивных опухолях - полное удаление мочевого пузыря и тазовых лимфоузлов (цистэктомия). У мужчин при этом убираются простата, семенные пузырьки, а у женщин - передняя стенка влагалища и матка с придатками. Один из участков кишки отсекают, из него формируют резервуар для мочи. Пересаживают туда мочеточники, подшивают «конструкцию» к мочеиспускательному каналу. Самостоятельное опорожнение нового пузыря сохраняется. При необходимости используют другие методы отведения мочи.

Лучевая терапия. Помогает уничтожить опухоль или уменьшить ее размеры, что облегчает последующее оперативное вмешательство.

Химиотерапия. Показана пациентам с распространенным раком. Обычно препараты вводят в вену, иногда - внутрь мочевого пузыря. Метод показан лишь на ранних стадиях.

Внутрипузырная иммунотерапия. Чаще всего используется вакцина БЦЖ. Введение ее прямо в пузырь приводит к активизации иммунной системы, помогает организму бороться с опухолевыми клетками.

Наилучший способ защиты от рака мочевого пузыря - устранение факторов риска, которые могут влиять на развитие болезни:

• откажитесь от сигарет;
• избегайте воздействия химических веществ на производстве. Если имеете дело с ароматическими аминами, следуйте инструкции безопасности;
• пейте достаточно жидкости. Это приводит к более частому мочеиспусканию и разбавлению канцерогенных веществ в моче, а также ограничивает время их контакта со слизистой оболочкой органа;
• соблюдайте диету. Брюссельская и цветная капуста могут снизить риск развития недуга: они содержат фермент, который защищает клетки и препятствует их превращению в опухолевые.

Игорь Масанский, заведующий онкохирургическим отделением № 3 Минского городского клинического онкодиспансера, кандидат мед. наук. 

Цель исследования – диагностика потенциально чрезвычайно опасных, угрожающих жизни опухолей уринарного тракта высокой степени злокачественности (HGUC). Цитологическое исследование введено в мировую медицинскую практику в 1945 году Дж. Папаниколау.

Уринарный тракт – это анатомические структуры, выполняющие функцию мочевыделения. Он состоит из почечных лоханок, мочеточников, мочевого пузыря и уретры. Переходный эпителий или уротелий, покрывающий уринарный тракт при определённых обстоятельствах становится источником новообразований, которые весьма разнообразны, как по морфологическому строению, так и по степени злокачественности. Первичные злокачественные опухоли почечной лоханки и мочеточника составляют всего 5-6% от всех опухолей уротелия, так что, основная доля угрожающей жизни патологии приходится на опухоли мочевого пузыря (МЗ РБ ГУ РНПЦ ОМР им. Н.Н. Александрова. «Алгоритмы диагностики и лечения злокачественных новообразований», 2012).

Ежегодно в РБ выявляют 1000-1200 новых случаев рака мочевого пузыря на различных стадиях развития. Страдает преимущественно мужское население. В Европейских странах, в структуре общей онкологической заболеваемости, рак мочевого пузыря занимает 4-е место у мужчин и 14-е – у женщин. В подавляющем числе случаев – это уротелиальная карцинома высокой степени злокачественности (HGUC), которая проявляет себя клинически гематурией, т.е. появлением крови в моче. За последние 20 лет в нашей стране заболеваемость выросла почти в 2 раза. Относительно высокий показатель отношения смертности к заболеваемости, который составляет 0.33, означает, что каждый третий пациент погибает, а это, без сомнений, свидетельствует об отсутствии эффективных неинвазивных методов ранней диагностики.

В последние годы учёные рассматривают возможность вирусной природы рака мочевого пузыря. Полиомавирус человека 1 , более известный, как полиома- BK-вирус , уже многие годы притягивает к себе внимание исследователей в данной области, как потенциально опасный фактор развития неопластических процессов мочевыводящей системы. Этот вирус широко распространён среди всей популяции человека. Можно сказать, что им инфицировано до 90% взрослого населения нашей планеты. Впервые, штамм человеческого полиомавируса был выделен из мочи ещё в 1971 году. В названии этого штамма заглавные латинские буквы BK соответствуют инициалам того пациента, у которого его обнаружили. И за последние два десятилетия, наши представления о роли этого вируса серьёзно эволюционировали. Неоспоримым является тот факт, что при снижении иммунологической защиты, а именно при проведении цитостатической терапии у пациентов с аллографт трансплантацией почек, полиома-BK-вирус является основной причиной BKV аллографт нефропатии, уретрального стеноза и геморрагического цистита (Drachenberg CB, Hirsch HH, Ramos E, Papadimitriou JC (2005). Hum. Pathol. 36: 1245-1255).

Вирус проникает в организм человека через верхние дыхательные пути и долгое время бессимптомно персистирует преимущественно в уротелии, а также в костном мозге, вызывая латентное инфицирование. Здоровая иммунная система контролирует бессимптомное пребывание вируса в организме человека. Однако, при нарушеннии иммунного надзора, возникающего по тем или иным причинам, вследствие угнетения функции иммунитета, происходит активация BKV-вируса. А морфологическим отражением перехода из латентного состояния в активное, является появление специфических клеток. В уротелиальном эпителии вирусные частицы образуют внутриядерные включения, в результате чего, клетка приобретает очень характерные морфологические черты. Первое описание таких клеток с включениями вирусных частиц дал доктор Koss LG 40 лет назад, обнаружив их в моче пациента после проведенной трансплантации почки. Он назвал их Decoy-клетки. Они могут быть 4-х типов и до последнего времени, среди цитопатологов доминируют представления, что эти инфицированные клетки нельзя относить к злокачественным. Но их появление в моче пациента с аллографт трансплантацией, является самым ранним признаком угрозы BKV аллографт нефропатии. На данных рисунках представлены 4 морфологических типа Decoy-клеток.

Иными словами, Decoy- клетки – самые ранние предвестники отторжения трансплантата. Но только с внедрением в практику жидкостных технологий приготовления препарата из свежевыпущенной мочи или из смыва мочевого пузыря, с окраской по Папаниколау, стало возможным обнаруживать эти клетки, и с высокой чувствительностью и специфичностью отличать их от злокачественных. В настоящее время обнаружение Decoy-клеток в моче является скрининговым тестом BKV нефропатии. Кроме того, у пациентов, перенесших трансплантацию почки, наряду с Decoy-клетками, часто обнаруживают клетки уротелия, с признаками выраженной клеточной атипии, соответствующими цитоморфологическим характеристикам уротелиальной карциномы высокой степени злокачественности, а также клетки, которые несут в себе одновременно черты, присущие и Decoy-клеткам, и клеткам HGUC. Эти клетки не только имеют смешанные черты Decoy-клеток и злокачественных, но и несут в себе протеины (SV-40 T) полиома-BK-вируса (Galed-Placed I, Valbuena-Ruvira L. Diagn Cytopathol.2011 Dec;39(12):933-7). Многие из клинических случаев, описанных в литературе, свидетельствуют о возможной онкогенной роли полиома-BK-вируса в возникновении уротелиальной карциномы (Hassan S, Alirhayim Z, Ahmed S, Amer S. Case Rep Nephrol.2013; 2013:858139). Протеины BKV оказывают повреждающее действие на синтез белков-супрессоров опухолевого роста (р53), что приводит к нарушению процесcов восстановления ДНК. Этот патогенетический механизм лежит в основе возникновения генетически нестабильных изменений, приводящих к трансформации нормального уротелия сначала в диспластичный, а затем в уротелиальную карциному высокой степени злокачественности (HGUC). HGUC характеризуется высокой частотой рецидивов и прогрессии до мышечно-инвазивных стадий Т2,Т3,Т4 с метастазами в лимфатические узлы. в 95% случаев всех смертельных исходов от рака мочевого пузыря устанавливают диагноз HGUC. Итак, достоинства цитологического исследования уротелиального тракта:

• Неинвазивность процедуры (анализ из «баночки»);
• Высокая специфичность диагностики HGUC, приближающаяся к 100%;
• Высокая чувствительность диагностики HGUC ~ 80%;
• ~30-70% пациентов с HGUC выживают;
• ~5-15% случаев HGUС прогрессируют; статистика США.
• 535 000 пациентов с раком мочевого пузыря выжили.

Предпочтительной технологией приготовления цитологического препарата мочи является жидкостная осаждением (BD SurePath), которую мы используем в нашей лаборатории. Тонкослойные мазки позволяют проводить дальнейшую диагностику с использованием всего арсенала молекулярно-генетических методов (иммуноцитохимия, FISH, и т.д.).

Цитологический диагноз HGUC объединяет в себе все генетически нестабильные злокачественные опухоли уротелия, гистологически весьма разнообразные. С целью оптимизации подходов к интерпретации уринарной цитопатологии и стандартизации критериев диагностики, на международном конгрессе в Париже, в 2013 году была принята новая цитологическая система классификации. Она во многом напоминает систему Bethesda для цитологического анализа патологии щитовидной железы и цервикального канала.

Категории	Парижская система оценки цитологии уринарного тракта	Вероятность злокачественной опухоли
I	Неудовлетворительный/недиагностический материал	0-10%
II	Негативная по уротелиальной карциноме высокой степени злокачественности (NHGUC)	0-10%
III	Атипическая уротелиальная клетка (AUC)	8-35%
IV	Подозрение на уротелиальный рак высокой степени злокачественности (SHGUC)	50-90%
V	Уротелиальная карцинома низкой степени злокачественности (LGUC)	~10%
VI	Уротелиальная карцинома высокой степени злокачественности (HGUC)	>90%
VII	Другие опухоли, первичные и вторичные	>90%

Итак, цитологическое исследование мочи с применением жидкостных технологий приготовления мазка и использованием диагностических критериев Парижской классификации 2014 года, является основным неинвазивным методом диагностики и мониторирования уротелиальной карциномы высокой степени злокачественности.

1423 0

Говоря о методах лабораторной диагностики ранней онкологической патологии в мочевом пузыре, их сразу следует разделить на рутинные методы, каковыми являются микроскопическое и цитологическое исследование осадка мочи, и довольно сложные биохимические, позволяющие выявить определенные состояния гомеостаза, не только характерные для конкретной формы злокачественной опухоли, но и предшествующие ее возникновению.

Мы имеем в виду биохимическое исследование мочи, которое выявляет нарушенный обмен триптофана, проявляющийся появлением в моче его канцерогенных метаболитов.

Это может быть и у больных раком мочевого пузыря, и у практически здоровых людей, что свидетельствует об определенной предрасположенности к возникновению заболевания и считается одним из эндогенных факторов риска.

То же самое можно сказать и о значении повышенной активности в-гиалуронидазы - фермента мочи, под воздействием которого в мочевом пузыpe происходит распад неканцерогенных комплексов с высвобождением активного начала. Так, комплекс, состоящий из 2-амино-1-нафтола, соединенного с глюкуроновой или серной кислотой в печени и поэтому потерявшего свои канцерогенные свойства, под действием в-гиалуронидазы или сульфатазы мочи распадается в мочевом пузыре с образованием активного 2-амино-1-нафтола, оказывающего канцерогенное воздействие на уроэпителий.

Своевременное выявление ранней онкологической патологии

Говоря о своевременном выявлении ранней онкологической патологии (РОП) в мочевом пузыре, следует согласиться с мнением М. Mebel et al. о том, что, несмотря на значительный прогресс в области диагностики, рутинные методы - исследование эритроцитурии, осмотр доступных отделов мочевого тракта, ректальная пальпация - остаются основой для раннего диагноза, но явно недостаточно используются. Достаточно указать на то, что у многих больных, обратившихся в поликлинику с неурологическими жалобами, наличие в общем анализе мочи эритроцитов не служило поводом для направления к урологу ни для врачей широкого профиля, ни для узких специалистов.

А между тем, проводя проспективное эпидемиологическое исследование контингента из 3400 практически здоровых людей с целью выявления у них РОП мочевого пузыря, мы выполнили 2143 лицам (63,0%) микроскопическое исследование осадка мочи, а 696 (20,5%) - цитологическое и выявили значительный процент патологии у лиц, не собиравшихся обращаться за медицинской помощью, чувствующих себя практически здоровыми.

Гематурия выявлена у 18,1% мужчин в группе риска и 7,9 - контроля, у женщин соответственно, - 23,1 и 10,7%. Естественно, что все эти люди нуждаются в дальнейшем урологическом обследовании, которое позволит установить причину урологической патологии, в том числе и онкологической. Здесь следует подчеркнуть, что лабораторная диагностика ранней онкологической патологии в мочевом пузыре не может быть самостоятельным методом, она, как правило, должна быть дополнена цистоскопическим исследованием с биопсией .

Показаниями для проведения цитологического исследования осадка мочи служат все формы макро- и микрогематурии, неясные дизурии, цисталгии, злоупотребления аналгетиками, профессиональные контакты с ароматическими аминами. Цитологическое исследование незаменимо при опухолях мочевого пузыря интраэпителиального типа - cancer in situ, которые не могут быть выявлены эндоскопически, а также при раке дивертикула мочевого пузыря, стриктурах уретры, малой емкости органа.

Следует еще раз подчеркнуть, что этот теоретически идеальный метод не может быть самостоятельным ни в диагностике рецидивов рака в мочевом пузыре, ни, тем более, при выявлении РОП. По данным многих авторов, это подтверждает довольно высокий процент несовпадений цистоскопической картины с результатами цитологии мочи, только у 70,0% больных уроэпителиальным раком цитологическое исследование выявляет раковые клетки.

J. Tostain et al., анализируя 500 цитологических исследований у 342 больных уроэпителиальными опухолями, показали, что при типичных папилломах мочевого пузыря цитологическое исследование неэффективно, при инфильтративных раках низкой степени злокачественности цитология мочи позволяет поставить диагноз в 66,0% случаев, при высокой - в 80,0%.

Рядом авторов (Mansat A. et al., Droese et al.) установлена четкая корреляция между степенью анаплазии клеток и цитологическим выявлением опухоли. В частности, показано, что при использовании классификации Bergevist I, II, III степени в зависимости от анаплазии клеток, при первой степени опухоль выявлена лишь в 19,0%, второй - 30,0, третьей - 70,0.

До сих пор нет общепринятых цитологических методов исследования опухолей мочевого пузыря. Одни исследователи считают ценным метод эксфолиативной цитологии при исследовании мочевого осадка свежевыпущенной мочи (Енохович В.А., 1966; О.П. Ионова с соавт., 1972), другие предпочитают аспирационную биопсию (Volter D. et al, 1981), третьи указывают, что наилучшие результаты дает метод смыва слизистой оболочки мочевого пузыря (Ломоносов Л.Я., 1978).

Ошибки в цитологической диагностике

Ошибки в цитологической диагностике определяют несколько факторов: плохой материал, который получен при воспалительном процессе или некрозе опухоли, незначительное его количество или слабо выраженная атипия клеток. Поэтому, естественно, ведется поиск наиболее рационального взятия материала для работы. Так N. Holmguist указывает на высокую степень выявляемости рака мочевого пузыря (1,2 на 1000) при цитологическом исследовании влажных препаратов осадка мочи и предлагает использовать эту методику для скрининга.

Л.Я. Ломоносов рекомендует для массовых профилактических осмотров групп повышенного риска способ активного смыва мочевого пузыря в собственной модификации, когда перед проведением смыва тщательно промывается мочевой пузырь фурациллином, после этого вводится 50-100 мл спиртового раствора новокаина из расчета 15 мл 96° спирта на 100 мл 1% раствора новокаина .

Через 5-10 минут раствор собирается в чистую посуду. После макроописания смыва материал центрифугируется при 3000 оборотов в 1 минуту в течение 15 минут, Надосадочная жидкость смывается, а из центрифугата приготовляются мазки.

При этом ряд авторов работали над рациональной техникой приготовления мазков, поскольку задержка внедрения цитологического исследования во многом обусловлена трудностями окраски клеток в моче. Поэтому С. Fiedler et аI. проводят несколько окрасок - метиленовым зеленым, пиронином и хромалауном по модифицированному ими способу.

Ложноположительные результаты чаще всего связаны с неправильной оценкой уротелиальных клеток с диспластическими изменениями при мочекаменной болезни, хроническом воспалительном процессе. Так, из 135 больных с конкрементами верхних мочевых путей у 7,2% установлена цитологическая картина аналогичная высокодифференцированному раку. В моче лиц, длительно страдавших мочекаменной болезнью, С. Dimopoulos et al. наблюдали наличие клеток 3 и 4 степени злокачественности по Паппаниколау и исчезновение их после оперативного удаления камней.

О.П. Ионова с соавт. при воспалительных процессах находили в цитограммах атипичные клетки, мало отличающиеся от опухолевых. Интерпретация цитограмм представляется довольно сложным делом, может быть, поэтому до сих пор нет общепринятых критериев озлокачествления эпителиальных опухолей мочевого пузыря.

Имеющиеся многочисленные данные по этому вопросу касаются, в основном, диагностики рецидивов рака и достаточно редких случаев распознавания "рака в клетке" - cancer In situ. Лишь у отдельных авторов описаны цитограммы при простой и пролиферирующей папилломах мочевого пузыря - Г.А. Арзуманян, В.А. Енохович, О.П. Ионова с соавт., Л.Я. Ломоносов.

Ряд других - М. Beyer-Boon et al. указывают на то, что папилломы вообще не могут быть диагностированы на основании цитограмм, последние при типичных папилломах не отличаются от нормограмм и только обнаружение папиллярных фрагментов опухоли позволяет поставить диагноз.

Дело в том, что цитограммы смывов мочевого пузыря в норме бедны клеточными элементами. Большинство встречающихся клеток - это клетки покровной зоны переходного эпителия. Они крупных размеров, полигональной или вытянутой формы. Ядра мелкие, округлые или овальные, расположены центрально или слегка эксцентрично.

Клетки промежуточной зоны цилиндрической формы, располагаются или в виде папиллярных папоротникообразных структур, или в виде розеток, или в виде виноградоподобных гроздьев. Ядра овальные, хроматин мелкоглыбчатый, равномерно распределяющийся по площади ядра. В отдельных работах обращается внимание на специфические для смывов гигантские многоядерные клетки с частыми фигурами митоза.

Из неэпителиальных элементов обнаруживаются эритроциты, лейкоциты, кристаллы солей. В работе А.В. Журавлева указывается на тс что в смывах в норме не должно быть форменных элементов. При воспалении отмечается увеличение количества клеточных элементов за счет клеток промежуточной и базальной зон, переходного эпителия и клеток воспалительной природы.

В мазках при типичной папилломе обнаруживаются одинаковые по величине клетки цилиндрической, овальной, округлой и веретенообразной формы. Могут встретиться "хвостатые" клетки. Ядра их мономорфные с компактной структурой хроматина, содержат 1-2 ядрышка. Ядерно-цитоплазменное соотношение не нарушено.

По мнению Г.А. Арзуманяна, характерным является отсутствие многоядерных клеток, свойственных верхнему, дифференцированному слою переходного эпителия. М.П. Птохов считает наиболее характерным моментом - наличие вытянутых хвостатых клеток.

Цитологические критерии малигнизации папиллом

Цитограммы пролиферирующих папиллом отличаются более выраженным полиморфизмом и полихромазией клеток. Ядра увеличены в размерах, в них увеличивается количество ядрышек. В.А. Енохович находит характерным для данной группы папиллом наличие овальных и округлых клеток опухоли. Н. Hanschke отмечает большое количество двуядерных клеток.

Л.Я. Ломоносов выделяет следующие цитологические критерии малигнизации папиллом:

Повышенную митотическую активность клеток;
полиморфизм ядер с огрублением структуры;
уменьшение содержания гликогена в цитоплазме;
увеличение клеточных слоев более пяти.

Он указывает, что иногда начинающуюся малигнизацию легче обнаружить в цитограммах, нежели гистологических препаратах.

При переходноклеточной карциноме мочевого пузыря все авторы отмечают полиморфизм, полихромазию клеток цитограммы, нарушение ядерноцитоплазменного соотношения в пользу ядра, изменение структуры хроматина. гипертрофию и гиперплазию ядрышек и дистрофические изменения цитоплазмы. Б.Л. Полонский и Г.А. Арзуманян характерным для рака считают многоядерность клеток.

Естественно, что такое исследование должно производиться опытным специалистом и требует относительно много времени. Поэтому в целях превращения в автоматический скрининг-метод начали использовать импульсную цитофотометрию, которая позволяет подсчитать за одну секунду 1000 клеток, окрашенных флуоресцирующей краской.

В ряде работ (Klein F. et al., 1982; Frankfurt O. et al., 1984; Dean P. et al., 1986) указывается на перспективную роль в диагностическом отношении coстояния цитологического исследования мочи и метода проточной цитометрии при котором производится измерение содержания ДНК, РНК и размеров ядер.

С помощью импульсной цитофотометрии изучали количественно ДНК и белки в эпителиальных клетках свободно вытекающей мочи, промывных видах мочевого пузыря и суспензии из ткани опухоли. Таким образом была выявлена связь между наличием анэуплоидных клеток в смывах мочевого пузыря и развитием инвазий у больных.

Установлено, что большинство поверхностных опухолей мочевого пузыря диплоидно, а инвазию сопровождает анэуплоидность. Поэтому проточно-цитометрический анализ содержания ДНК является количественной мерой для предсказания степени злокачественности опухоли, а также для диагностики cancer in situ.

В работе К. Nielsen дана стереологическая оценка объема ядер илиэистой оболочки мочевого пузыря в норме и злокачественном процессе. Автор исследовал 27 биоптатов из мочевого пузыря: 10 - в норме, 5 - при инфекции, 12 - при опухолях. Морфометрическое исследование установило средний объем ядра в норме и при инфекции, равным 133 и 182 мкм3, при cancer in situ - 536 мкм3.

Помочь выявлению клеток с повышенным содержанием ДНК может предлагаемый фирмой "ЦИТОДИАГНОСТИКА" тест, основанный на количественном определении флуоресценции. Применяемую краску связывают клетки с повышенным содержанием ДНК и это обстоятельство позволяет выявить одну раковую клетку среди тысячи нормальных. Фирма предлагает применять этот тест для скрининга контингентов с повышенным риском заболевания раком мочевого пузыря.

Но следует отметить, что использование предлагаемых методик с целью профилактики опухолей мочевого пузыря встречает большие затруднения, которые начинаются сразу же, уже при заборе мочи - в несвежей моче клетки значительно изменяются. Понятно, что для профилактических осмотров наиболее приемлемым цитологическим исследованием может стать исследование осадка свежевыпущенной мочи, ни метод аспирационной биопсии, ни метод смыва со слизистой оболочки мочевого пузыря не могут стать массовыми.

Цитологическое исследование осадка мочи, примененное нами с целью выявления ранней онкологической патологии мочевого пузыря в профилактически обследуемых контингентах не оправдало наших надежд - ни разу при выполнении обследования 696 практически здоровым лицам, из которых 185 (38,6%) относились к группе риска, а 511 (17,4%) - к контрольной, признаков атипии клеток не было установлено, хотя исследование проводилось опытными цитологами в центральной цитологической лаборатории города

Отдельные методы лабораторного исследования

Отдельные методы лабораторного исследования позволяют выявить известную предрасположенность к возникновению этой формы рака. Мы имеем в виду эндогенные факторы риска - нарушенный обмен триптофана с появлением в моче его канцерогенных метаболитов - 3-оксиантраниловой кислоты, 3-оксикинуренина, кинуренина и др а также повышение активности в-гиалуронидазы мочи.

Наличие канцерогенных метаболитов триптофана в моче свидетельствует о повышенном риске заболевания, часто определяется у больных раком мочевого пузыря, в том числе и рецидивного, указывает на необходимость проводить коррекцию обмена триптофана, т.е. заниматься биохимической профилактикой опухоли.

При формировании групп риска по эпидемиологическим тестам выявление из них лиц с наличием канцерогенных метаболитов триптофана в моче помогает еще более сузить круг лиц. нуждающихся в пристальном внимании уролога.

Для определения спектра метаболитов триптофана в моче обследуемых можно использовать метод одномерной нисходящей хроматографии на бумаге. Экстракцию метаболитов производят однократно из 100 мл утренней мочи по методу Makino в модификации Wachstein, Lobel.

Для этого мочу насыщают сернистым аммонием для осаждения белков и солей. Затем мочу фильтруют. К полученному фильтрату добавляют 20 мл расплавленного фенола и в течение 20-25 минут встряхивают на универсально-встряхивательном аппарате. Полученную смесь отстаивают в делительной воронке, где быстро разделяются два слоя: верхний - желтый с коричневым оттенком - слой фенола, нижний - бесцветный - слой мочи.

Нижний удаляют, к верхнему добавляют 20 мл серного эфира и энергично встряхивают для улучшения растворения фенола в эфире. Фенол при этом переходит в верхний, более светлый слой, а нерастворимая в эфире водная фракция, содержащая ароматические производные триптофана остается в нижней части делительной воронки в виде темного маслянистого слоя объемом 0,5-0,7 мл.

Этот слой осторожно сливают в выпаривательную чашку и высушивают в вытяжном шкафу. Высушенный экстракт растворяют в 0,2 мл дистиллированной воды и в количестве 0,02 мл наносят на хроматографическую бумагу ("Ленинградская медленная"), предварительно промытую смесью эфира и спирта в соотношении 3:1.

После высушивания бумагу помещают в предварительно насыщенную растворителями камеру. В качестве растворителя используют следующую систему растворителей - Н-бутиловый спирт: ледяная уксусная кислота: вода - 4:1:1. Разгон производят при комнатной температуре в течение 20-24 часов.

После этого хроматограммы высушивают и обрабатывают реактивом Эрлиха 12 г парадиметиламинобензальдегида + 20 мл 6NHCI + 80 мл этилового спирта). Сразу же после этого на хроматограммах появляются пятна желто-оранжевого цвета, которые дают с этим реактивом мочевина и ароматические производные триптофана, и пятна голубовато-сиреневого цвета обусловленные индольными производными последнего.

По характерной окраске с реактивом Эрлиха, величине Rf и сравнению со стандартами описанный метод позволяет идентифицировать следующие метаболиты триптофана - мочевину, триптамин, индикан, триптофан, 3-оксикинуренин, кинуранин, 3-оксиантраниловую кислоту. Последняя является наиболее сильным эндогенным канцерогеном для уроэпителия, дает характерное розовато-оранжевое окрашивание с реактивом Эрлиха и величину Rf, равную 0,75-0,8.

Определение активности |киалуронидазы мочи проводится с той же целью. Но этот метод позволяет дифференцировать папилломы мочевого пузыря от инвазивного рака и большинством авторов расценивается как вспомогательный при диагностике эпителиальных опухолей мочевого пузыря

Активность фермента в моче определяется общепринятым фенолфталеиновым методом. Для этого собирается моча за сутки под тонким слоем толуола, который предохраняет ее от разложения; затем определяется ее общии объем, удельный вес, наличие белка, лейкоцитов, сахара и обязательнo проводится посев на микрофлору.

Последний необходим в связи с тем, что различные микроорганизмы, особенно кишечная палочка, могут быть источником в-гиалуронидазы. В случаях инфицирования мочевого пузыря моча из дальнейшего исследования исключается.

Затем из каждого образца отбирается по 4-5 мл мочи, которую центрифугируют на центрифуге ЦНЛ-2 при 8-9 тысячах оборотов в течение 8-10 минут. В дальнейшем по количеству исследуемых проб в градуированные стеклянные центрифужные пробирки объемом 10 мл наливают 0,5 мл 0,1 М ацитатного буфера, сюда же добавляют 0,5 мл 0,05% раствора субстрата фемолфталеинглюкуронида (фирма Sigma) и лишь в самом конце исследуемой и предварительно отцентрифугированной мочи.

Добавление щелочи делало PH смеси равным 10, 2-10, 4, т е. тот оптимум, при котором происходит и наиболее интенсивное малиново-красное окрашивание отделившегося под влиянием мочевой в-гиалуронидазы фенолфталеина. Дальнейшее определение производится на спектрофотометре СФ-4 при длине волны, равной 540 мм

Окрашенные образцы сравнивают с так называемыми "пустыми" баннами, которые содержали те же самые растворы и в тех же самых концентрациях и количествах, но не подвергались инкубации и готовились непосредственно перед определением фенолфталеина в каждом опытном образце.

Количество выделившегося фенолфталеина определяют по предварительно составленной калибровочной шкале с последующим перерасчетом на 1 мл за 1 час инкубации.

Уровень активности энзима при анализе мочи здоровых лиц колебался от 0,4 до 1,1 и составлял в среднем 1,0 ЕД. Фишмана в 1 мл/час. При папилломах мочевого пузыря отмечается повышение активности фермента в 1,2-1,4 раза. Причем, это повышение является постоянным и не зависит от проводимых лечебных мероприятий. При раке мочевого пузыря активность в-гиалуронидазы в моче повышена не менее, чем в 2-3, а иногда и более раз достигая 5 ЕД Фишмана.

При определении активности этого фермента следует учитывать, во-первых, сопутствующие заболевания у пациентов. Это касается, прежде всего, гепатитов и панкреатитов, которые сами по себе дают резкое увеличение его активности в моче. Во-вторых, следует подчеркнуть, что даже про ведение одной лишь цистоскопии, не говоря о более сложных хирургических вмешательствах, сразу же приводит к повышению уровня активности фермента в моче по сравнению с исходными данными, и только через 8-10 дней активность в-люкуронидазы возвращается к исходным цифрам.

По данным М.Н. Власова с соавт., которые мы здесь приводим не отмечается различий в повышении или уменьшении активности фермента в зависимости от возраста и пола больных, а также химиотерапевтического или лучевого методов лечения.

Этот метод авторы используют как вспомогательный для диагностики опухолей эпителиального типа в мочевом пузыре. Он же может быть рекомендован при проведении мероприятий по биохимической профилактике рака мочевого пузыря, направленной на снижение активности в-люкуронидазы в моче для контроля за этой активностью.

Естественно, что из-за трудоемкости и сложности, метод не может применяться в качестве скринингового, но в группах риска применение его вполне оправдано с целью определения лиц, имеющих важный эндогенный фактор риска и в этой связи нуждающихся в соответствующих профилактических мероприятиях.

Пряничникова М.Б.

Описание

Метод определения Микроскопия (окраска по Романовскому-Гимзе).

Исследуемый материал Смотрите в описании

Доступен выезд на дом

Материал для исследования:

1. мазки, приготовленные в лаборатории, из осадка транссудатов, экссудатов, секретов, экскретов и мочи;
2. мазки, приготовленные из отпечатков сцернирующей молочной железы.

Подготовка к исследованию и приготовление материала для исследования.

Транссудаты: проводят санацию места предполагаемого прокола и пункцию плевральной, перикардиальной, брюшной полости. Всю полученную из серозных полостей жидкость (не более 1 литра) помещают в ёмкость с притёртой или плотно закручивающейся крышкой, и доставляют в лабораторию в день взятия, чтобы не разрушились клеточные элементы. Если объём жидкости менее 100 мл, то её доставляют в стерильном контейнере с красной крышкой. Экссудаты, секреты, экскреты: биоматериал собирают в стерильный контейнер с красной крышкой и доставляют в лабораторию в день взятия, чтобы не разрушились клеточные элементы. Моча: для сбора мочи используется стерильный контейнер с крышкой, который можно получить в любом из медицинских офисов ООО ИНВИТРО. В контейнер собирают утреннюю порцию мочи. В медицинском офисе или медицинском центре из собранной мочи изготавливают мазки на предметном стекле. Предметные стекла (мазки) доставляют в лабораторию. Если набора для общего анализа мочи пациенту получить заранее не удалось по объективным причинам, то утренняя порция мочи собирается пациентом в стерильную ёмкость с плотно закрывающейся крышкой. Ёмкость должна быть доставлена в медицинский офис ИНВИТРО или в медицинский центр строго в течение 2 часов с момента взятия! Недопустимо замораживать пробу и использовать консервант для хранения и транспортировки мочи. Для повышения качества диагностики исследование целесообразно проводить три раза. Выделения из молочной железы: отпечатки сцернирующей молочной железы получают путём прикладывания сухого, обезжиренного предметного стекла к нужному соску; при скудных выделениях для получения биологического материала делают массажные движения по молочной железе в сторону соска. Мазки готовят из первой и последующих капель. Первая капля, как правило, содержит наибольшее количество клеточных элементов. Полученный биологический материал наносят тонким, равномерным слоем на центральную часть предметного стекла. Биоматериал на стёклах находится на воздухе до полного высыхания. Стекла аккуратно маркируют и отправляют на исследование в лабораторию.

Показания к назначению

• Жидкость в серозной полости.
• Сцернирующая молочная железа.
• Опухоль в мочевом тракте.
• Подтверждение, уточнение клинического диагноза.
• Установление диагноза в неясных случаях.
• Диагностика неопухолевых, предопухолевых и опухолевых заболеваний.

Интерпретация результатов

Интерпретация результатов исследований содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом. Информацию из этого раздела нельзя использовать для самодиагностики и самолечения. Точный диагноз ставит врач, используя как результаты данного обследования, так и нужную информацию из других источников: анамнеза, результатов других обследований и т.д.

Результат цитологического исследования зависит от адекватности и качества полученного материала, правильной фиксации материала, правильности и полноты предоставленной информации о пациенте. При отсутствии клинической информации, данных анамнеза и описания материала невозможно дать точное и адекватное клинической картине цитологическое заключение о патологическом процессе. Форма цитологического заключения: описание общей цитологической картины, сопоставление цитологических данных с клиническими данными о пациенте с определением характера патологического процесса согласно современным классификациям, и, при необходимости, с указанием степени активности, этиологии заболевания.